尊龙凯时提供了一种感染预实验的标准流程，以24孔培养板为例，进行目标细胞与工具细胞（如293T人胚肾上皮细胞或H1299人肺癌细胞）的感染实验。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪及枪头、EP管、细胞计数板、冰盒、废液缸等。根据目标细胞的具体情况，可能需要使用Polybrene。

第一天：细胞准备

将细胞培养至对数生长期，使用胰酶消化后计数，并测定细胞密度。每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL细胞培养液。通常情况下，H1299或293T细胞在感染后第三天可达到80%至90%的融合度。在接种目标细胞时，应根据细胞的实际生长速度调整接种量，以保证感染后第三天的融合度在80%至90%之间。

第二天：慢病毒颗粒准备与细胞感染

（1）准备慢病毒颗粒：计算所需的慢病毒颗粒量，并将冻存于-80℃的慢病毒颗粒取出进行冰浴融化。

（2）感染目标细胞：观察细胞在显微镜下的生长状态，如果细胞状态良好则可以开始实验：
A. 小心吸去24孔培养板中的旧培养液，并加入新的完全培养液；
B. 向细胞中加入计算好的慢病毒颗粒液，并轻柔混匀；
C. 将培养板置于37℃、5% CO₂的培养箱中过夜培养。

第三天：培养液更换

在感染12-16小时后，吸出含有慢病毒颗粒的培养液，并重新添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养。根据目标细胞的特性，感染时间可能需要调整，部分细胞感染时间应不超过12小时。

第四天：细胞状态观察

继续培养细胞，观察其状态是否存在异常。

第五天：感染效率评估

观察慢病毒颗粒的感染效率。对24孔培养板进行70%乙醇清理后，在倒置荧光显微镜下观察荧光效果，并记录照片以估计感染效率。如果慢病毒颗粒所携带基因的表达时间较长，建议在72至96小时后再观察荧光表达。

根据荧光表现，可以从MOI梯度中初步摸索出目标细胞的MOI值。通过遵循尊龙凯时的指导，您将能够更有效地进行细胞感染实验。